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茁彩生物?甲苯胺藍染色(蛋白質染色)

發布時間: 2023-05-24  點擊次數: 591次

甲苯胺藍染色法是一種常用的蛋白質染色方法,它可以用于檢測蛋白質的存在和定量。該方法基于蛋白質與甲苯胺藍(CoomassieBrilliant Blue)染料的相互作用,通過染色反應來檢測蛋白質。TWG CS-2 100-1.jpg


甲苯胺藍是一種有機染料,它具有強烈的吸附性和親和性,可以與蛋白質中的氨基酸殘基(主要是賴氨酸、精氨酸和組氨酸)發生靜電作用和氫鍵作用,形成染色復合物。這種染色復合物可以在紫外線下發出藍色熒光,從而實現蛋白質的檢測和定量。



甲苯胺藍染色法具有靈敏度高、操作簡便、成本低廉等優點,因此被廣泛應用于生物化學、分子生物學、生物醫學等領域。但是,該方法也存在一些局限性,如染色效果受蛋白質種類和含量的影響,染色后的蛋白質不能再次利用等。因此,在實際應用中需要根據具體情況選擇合適的染色方法。


實驗流程:

1、石蠟切片脫蠟至水。

2、切片浸入甲苯胺藍溶液1-5min(軟骨和肥大細胞著色較快,染1min軟骨和肥大細胞即呈鮮艷的紫紅色,其他成分和細胞著淺藍色;尼氏體著色較慢需染3-5min,神經元內的尼氏體著深藍色,背景幾乎無色。如著色不夠可稍微延長染色時間。)

3、水洗洗去多余染料(藍色在水里的時間過長也會稍許褪色)

4、脫水:無水乙醇I 2-5min-無水乙醇II 2-5min-無水乙醇III 2-5min-正丁醇2min-二甲苯透明數分鐘濕封。


結果判讀:

    可見尼氏小體深藍色顆粒,細胞核呈淡藍色,背景基本無色;或是肥大細胞呈紫紅色,背景淺藍色或是無色。 


注意事項:

1、染完色的片子不要烤干后二甲苯透明封片,否則片子上極易出現水珠;

2、脫水的酒精最好用干凈的無水乙醇含水量不能太高否則易脫色;

3、染色時可稍過染,因為在脫水的過程中藍色或紫紅色會緩慢褪色,如果背景過深可稍微延長脫水時間至肉眼看組織為極淺藍色或近乎無色。但脫水時間也不能太長否則顏色會全部脫色,并且肥大細胞的紫紅色會變成藍色。


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