細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA復制及修復、信號通路等是測定DNA合成情況研究方向的常用方法之一,用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物(BrdU 、EdU ),兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。
BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結合,
EdU因為其炔羥基團可以與一些熒光染料發生“Click"化學反應,無需變形,從而將細胞標記上熒光,因此應用更廣泛。
EdU和Brdu檢測區別
Brdu 檢測增殖細胞的特點及原理
Brdu(5-bromodeoxyuridine)是一種假核苷酸,它被用來檢測細胞增殖。它可以通過與正常DNA堿基結合,從而替換掉正常DNA。Brdu在細胞分裂時被復制到DNA中,并在細胞內存在一段時間,因此它可以用來指示哪些細胞正在增殖。
Brdu檢測的基本原理是:在細胞增殖過程中,Brdu會被復制到DNA中,并與DNA堿基結合。這些DNA含有Brdu的細胞可以通過免疫組化或FISH技術被檢測出來。
Brdu的檢測可以用于研究細胞的生長和分裂,也可以用于檢測癌癥細胞的增殖和活動。例如,Brdu可以用來檢測腫瘤細胞中的DNA損傷,以及化療藥物對腫瘤細胞的作用。
Brdu也可以用于檢測免疫系統中的細胞,例如檢測T細胞增殖以及抗原激活的活性T細胞。此外,Brdu也可以用來檢測神經細胞的發育。
Brdu檢測是一種有效的檢測細胞增殖的方法,它可以用來研究細胞的生長、分裂和發育,以及腫瘤細胞的活動和化療藥物的作用。
EdU 檢測增殖細胞的特點及原理
EdU(5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine,5‐乙炔基‐2′脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物,其化學結構特點是脫氧胸腺嘧啶環上與5位C原子相連的甲基被乙炔基取代,在S期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復制的DNA鏈中,
EdU在細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。熒光染料可以同EdU發生“Click"化學反應(點擊法),從而將增殖的細胞標記上熒光。可用于細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等,EdU亦適用于活體注射,穩定,對活體沒有副作用。
與傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,EdU檢測法更簡單、更快速、更準確,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。
EdU和Brdu檢測區別見下表
Edu | Brdu | |
---|---|---|
分子量大小 | 252.22 g·mol?1 | 307.098 g·mol?1 |
標記檢測方式 | 化學反應(點擊法) | 免疫反應 |
是否影響其他標記 | 不影響 | 影響 |
DNA是否變性 | 否 | 是 |
標記檢測時長 | ≤2.5 h | 過夜 |
檢測靈敏度 | 高 | 一般 |
EdU檢測的優點:
1、更簡單:僅需EdU孵育;無需抗原抗體反應,基于小分子化學反應的檢測方法簡單高效,反應僅需要幾分鐘;
2、更靈敏:無需抗體,檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴散,即便是單個增殖細胞也能準確檢測;
3、更快速:無需過夜,省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟,只需2.5 h;
4、更準確:無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細胞核邊緣清晰完整;
5、更兼容:允許與多種抗體、熒光染料同時標記;對樣品幾乎無損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記,能夠同時檢測細胞其他性狀特征;
6、應用性廣,細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、病毒增殖活性檢測,適用于各種動物細胞檢測,對植物細胞亦適用。