發(fā)布時(shí)間: 2022-12-16 點(diǎn)擊次數(shù): 945次
脫落酸ELISA檢測(cè)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),往預(yù)先包被激素脫落酸(ABA)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的激素脫落酸(ABA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
要選個(gè)合適的脫落酸ELISA檢測(cè)試劑盒主要看以下幾點(diǎn):
1、高靈敏度
2、特異性強(qiáng)
3、重復(fù)性好
4、經(jīng)濟(jì)
5、方便
6、快速
脫落酸ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)程序如下:
1、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線:設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔,每孔中各加入樣品稀釋液100ul,第一孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul,混勻后用加樣器吸出100ul,移至第二孔。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋至第六孔,最后,從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對(duì)照,第八孔為零孔。
2、加樣:待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品100ul混勻。
3、將反應(yīng)板充分混勻后粘上封板紙置37攝氏度120分鐘。
4、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。
5、每孔(除零孔)加第一抗體工作液50ul,置37℃60分鐘。
6、洗板:同前。
7、每孔(除零孔)加酶標(biāo)抗體工作液100ul(兩滴),將反應(yīng)板置37oC60分鐘。
8、洗板:同前。
9、每孔加入底物液A、B各一滴,置37攝氏度避光反應(yīng)15分鐘。
10、每孔加入1滴終止液混勻。
11、在450nm處測(cè)吸光值。