PLFAs是幾乎所有活體細(xì)胞膜的主要成分,周轉(zhuǎn)速率極快且隨細(xì)胞死亡而迅速降解,脂肪酸結(jié)構(gòu)與種類多樣,對(duì)環(huán)境因素敏感,分析結(jié)果重復(fù)性較好。既可用簡(jiǎn)單試劑和設(shè)備測(cè)定由PLFAs轉(zhuǎn)化的磷酸鹽以確定微生物總量,也可以根據(jù)不同菌群的特定脂肪酸C鏈長(zhǎng)度、飽和度及羥基等取代基位置差異研究特殊功能菌群。在微生物定量及活力測(cè)定方面,PLFAs與微生物量C、底物誘導(dǎo)呼吸(SIR)及ATP等測(cè)定方法所得結(jié)果十分吻合。因此,PLFAs在土壤微生物學(xué)研究中很有潛力。
磷脂脂肪酸在土壤中的功能主要包括以下幾個(gè)方面:
(1)作為細(xì)胞膜的組成成分,參與微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。
(2)可以作為能源來(lái)源,供給微生物進(jìn)行代謝和生長(zhǎng)。
(3)參與土壤中的有機(jī)質(zhì)的分解和循環(huán)過(guò)程。
(4)對(duì)土壤中的酶活性和微生物群落結(jié)構(gòu)具有調(diào)節(jié)作用。
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)稱3 g土壤與15 ml 0.2M甲醇化的KOH混勻,放入離心管中。
(2)在37℃培養(yǎng)1 h,每10 min漩渦震蕩一次。
(3)加入3 ml 1.0 M冰醋酸10 ml正己烷,分層。
(4)4800 r離心15 min。
(5)取上清移至試管,在氮?dú)庀麓蹈伞?/span>
(6)將試管內(nèi)磷脂脂肪酸溶解于0.5 ml 1:1甲基叔丁基醚:正己烷,轉(zhuǎn)移到氣質(zhì)聯(lián)用色譜分析用小管待分析。
將處理好的樣品用Agilent 6890GC / 5973 MS氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行分析,參數(shù)設(shè)定如下:
色譜柱:利用處理后的石英毛細(xì)管柱(0.25 mm×30 nm×0.25 um)。
樣口溫度為250℃,不分流進(jìn)樣。
采用恒流模式,流速為0.8 ml/min,載氣為高純氦氣。
程序升溫:80℃(保持2 min),以50°C/min的速度升至150 ℃(保持2 min),以2.5°C/min的速度升至195°C(保持3 min),再以2.5°C/min的速度升至240℃(保持5 min)。
電離方式:EI(70eV)
離子源溫度:150 ℃
四極桿溫度:230 ℃
接口溫度:280 ℃
掃描方式:SIM
C14:0是外標(biāo)物
磷脂脂肪酸含量計(jì)算公式
PLFA(nmol/g土樣)=(PPLFA × S × V)/(POSTD × D × R × W)
式中PPLFA和POSTD分別是樣品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰值面積,s為外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度(ng·ul-1),V為樣品的測(cè)定體積(ul),R為分取倍數(shù),D為稀釋倍數(shù),W為烘干土質(zhì)量(g)。