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茁彩生物|檸檬酸(CA)檢測

發布時間: 2023-06-26  點擊次數: 605次

檸檬酸(Citric Acid, CA),又稱枸櫞酸,是一種重要的有機酸,在自然界中分布很廣,天然的檸檬酸存在于植物如檸檬、柑橘、菠蘿等果實和動物的骨骼、肌肉、血液中。很多種水果和蔬菜,尤其是柑橘屬的水果中都含有較多的檸檬酸,特別是檸檬和青檸含有大量檸檬酸。

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目前,可采用分光光度法檢測檸檬酸(CA)的含量。

分光光度法是基于物質對光的吸收特性進行的。當光線穿過物質時,會被物質吸收,且吸收程度與物質的濃度成正比。因此,通過測量光線通過物質時的吸光度,可以確定物質的濃度。在 CA 含量檢測中,常用的分光光度法包括比色法、吸光光度法等。

一、樣品中檸檬酸提取:

a. 液體樣品中檸檬酸提取:取 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL,充分混勻,11000g/min 4℃離心 10min, 取上清液,待測。

b. 組織中檸檬酸提取:稱約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一,冰上充分研磨,11000g/min 4℃離心 10min,取上清液,待測。

c. 線粒體中檸檬酸提取:稱約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一,冰上充分研磨,600g/min,4℃離心5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min,4℃離心 10min,棄上清(此上清液可用于細胞質CA 含量測定);向沉淀中加試劑二 200µL,以及試劑三 2µL,充分懸浮溶解,11000g/min,4℃離心 10min,取上清液,待測。

二、測定:

1. 分光光度計預熱 30 min 以上,調節波長到 545 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑一置于 30℃水浴中預熱 30min 以上。

3. 按下圖在 1.5mLEP 管中加入相應試劑

試劑名稱(µL)

空白管

測定管

標準管

餾水

100



上清液


100


標準品



100

試劑一

700

試劑四

100

試劑五

100

充分混勻后室溫靜置 30min,于 545nm 測定吸光度,記為 A 空白管、A 測定管、A 標準管。



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