蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用廣泛的技術方法。
原理:
去氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱藍色,所以細胞核被染成藍色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在Chemicalbook水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷的陽離子結合使胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明對比。伊紅是細胞漿的良好染料。
樣本:
石蠟切片、冰凍切片
操作步驟:
蘇木素染細胞核:切片入Harris蘇木素染3-8min,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數秒,自來水沖洗,0.6%氨水返藍,流水沖洗。
伊紅染細胞質:切片入伊紅染液中染色1-3min。
脫水封片:將切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-無水乙醇Ⅰ5min -無水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。染色結果:細胞核藍色,細胞質紅色。
圖例展示:
實驗結果
細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。
著色情況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當其衰老時或發生退行性變則呈現嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現透明變性時,伊紅著色由淺變深。
H-E染色評定標準:
(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均勻,無皺褶無刀痕;
(2)染色核漿分明,紅藍適度,透明潔凈,封裱美觀