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ELISA檢測試劑盒檢測系統可以說是現在運用最多的檢測辦法,并且技術手段許多,關于花板,假陽性,全顯色,悉數顯色,顯色比空缺還低,這些都起到了至關重要的效果,必定要多留心,那么ELISA檢測系統安穩,這些實驗進程都要留心。
包被原的性質很重要,蛋白濃度,是否降解,這關系到你做出的抗體可不可以被其辨認,所以保存抗原很重要,我做重組蛋白時,師兄都嚴厲正告我必定要在冰浴下緩慢消融就是這個道理。封鎖就是讓很多不相關的蛋白質充填這些曠地閑暇,然后排擠ELISA后的過程中攪擾物質的再吸附。但有時由于實驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
應留心以下原理:由于蛋白質與聚苯乙稀固相載體是經過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質較小分子蛋白質一般含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體外表。小分子必需依靠和大的蛋白載體偶聯后才干固定在固相載體上.
還有有的包被原可能不是蛋白,關于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事前對其改造再加以包被,親和素生物素:先親和素先包被載體,參加生物素化的DNA,這種包被辦法均勻、結實,已擴展應用于各種抗原物質的定量測定。常用的包被液除了剛才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。